【摘要】 以固体吸附剂作为固定相,调节流动相极性,根据样品中各组分在吸附剂上性能差异实现分离。
近几年来HPLC发展迅速,各种方法相继涌现,特别是化学键和色谱法,已将固定相的稳定性、选择性、应用范围等提升到一个新的高度,这使得高效液相色谱具有不同的类型和分离模式,根据溶质在两相分离过程中的物理化学原理,分为以下几种方法:
(1)吸附色谱 以固体吸附剂作为固定相,调节流动相极性,根据样品中各组分在吸附剂上性能差异实现分离。
(2)分配色谱 用涂渍在载体表面的固定液作为固定相,调节流动相极性,根据样品组分在固定液中分配性能差异实现分离。又可分为正向分配色谱(固定相极性大于流动相)与反向分配色谱(固定相极性小于流动相)。
(3)离子交换色谱 使用高效微粒离子交换剂作为固定相,以具有一定pH值的缓冲溶液作为流动相,依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上带电荷基团进行可逆离子交换能力的差别来实现分离。
(4)体积排阻色谱 用化学惰性的多孔性凝胶作为固定相,按固定相对样品中各组分分子体积阻滞作用的差别来实现分离。分为凝胶过滤色谱法(水作为流动相)和凝胶渗透色谱(有机相做流动相)。
(5)亲和色谱 以在不同集体键合多种不同特性的配位体作为固定相,用不同pH缓冲液作为流动相,依据生物分子与固定相的配位体之间存在特异性和作用能力的差别,而实现对生物活性分子的分离。
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