高效液相色谱-4

除去之前描述的液-液分配色谱法和液-固分配色谱法分配模式外，化学键和色谱法以一种极为常见的色谱分离模式。以物理方法涂渍在惰性载体上的固定液较易流失，不适用于梯度洗脱。因此，人们将不同的有机官能团通过化学反应共价结合到硅胶表面的游离羟基上，生成化学键和固定相，这种方法被称为化学键和色谱法。

化学键和相对各种极性溶剂都有良好的化学稳定性和热稳定性，所制备的色谱柱柱效高、寿命长、重现性好，对各种有机官能团化合物呈现良好的选择性，适用于梯度洗脱。

化学键和相也可分为正向键合相和反向键合相。其中，正向键合相分离模式的固定相极性大于流动相，适用于分离油溶性或水溶性的极性和强极性化合物；反向键合相中固定相极性小于流动相，适用于分离非极性、极性或离子型化合物，应用范围要广于正相键合色谱，约占高效液相色谱应用领域的70%-80%。

反向键和相色谱法的分离机理有属于分配色谱和吸附色谱两种观点。

分配色谱机理认为，流动相中极性相对弱的溶剂分子被吸附在固定相表面的烷基官能团，而溶质分子在流动相中溶剂化后与吸附在固定相表面的弱极性溶剂分子置换，从而构成溶剂在固定相和流动相中的分配平衡。这与正相键合相色谱法机理类似。

而吸附色谱机理认为，溶质在固定相的保留是是疏溶剂作用，溶质分子浸入流动相后，占据流动相的空间从而排挤一定溶剂分子；当溶质分子与固定相接触时，溶质分子非极性部分与固定相结合，排挤对应的溶剂分子并形成溶剂膜。这种疏溶剂作用的作用力是可逆的，随流动相极性降低，会发生解缔，此时溶质分子释放被洗脱。

【1】张祥民. 现代色谱分析[M]. 复旦大学出版社, 2004.

【2】傅若农, 顾峻岭. 近代色谱分析[M]. 国防工业出版社, 1998.

【3】刘克玲. 实用仪器分析[J]. 国外科技新书评介, 2014(8):1.

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