【摘要】 氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl与氨基酸结合形成的衍生物稳定;灵敏度可达1.0pmol (组氨酸为4.5pmol)。
异硫氰酸苯酯(PITC)法用于氨基酸分析的文献报道很多,该法简便、快速;只需室温即可进行反应,且術生产物稳定;分析时间短;灵敏度高(可达1pmol);一、二级氨基酸均可检测。4-异硫氰酸邻苯二甲酰肼(25) (ILITC)、a- 异氰酸萘酯 (NIC)也是含有异氰基的衍生化试剂,ILITC除具有PITC的一般优点外检测灵敏度更高;a-异氰酸萘酯衍生产物稳定。
氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl与氨基酸结合形成的衍生物稳定;灵敏度可达1.0pmol (组氨酸为4.5pmol)。本法缺点为FMOC-CI与半胱氨酸、组氨酸、色氨酸形成的二衍生物由于荧光淬灭而产生较弱信号。组氨酸可通过将其衍生物于室温放置3~4天,使二衍生物转化为-”衍生物后再次进样。FMOC-CI及其水解产物FMOC-OH对测定有干扰,用戊烷提取以除去干扰。另一些具有氯甲酸酯结构的化合物,如氯甲酸2-硝基苄酯(NOC-CI)、 氯甲酸2-萘酯与FMOC-Cl具有相似结果;具有芴乙酸结构的化合物如芴乙酰氯用于氨基酸的衍生化灵敏度与氯甲酸芴甲酯相同,但较氯甲酸芴甲酯更为稳定,且更少受到水解产物的干扰。
氟(氯)苯法. CFDNB (CDNB)]国内报道较多。氟(氯)苯法为2, 4-二硝基氟(氯)苯与氨基酸在碱性条件下定量反应生成DNP-氨基酸,再用HPLC法分析测定。文献均报道该法具有分析时间短,成本低,重现性好,稳定性好等优点。用CDNB法测定11种氨基酸有良好的线性关系,最低检出量为2 μg。类似地,1-氟-2,4-二硝基苯基-5-丙酰胺,可与一、二级氨基酸反应,紫外法检测,检测至pmol,因使用衍生化试剂量少而受到较少的试剂千扰35; N, N-二乙基-2, 4-二硝基5-氟苯胺亦可用于氨基酸的衍生化测定,产物稳定。
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