【摘要】 t细胞沿着连续的状态经历激活和分化程序，可以通过流式细胞术使用表面和细胞内标记的组合来跟踪。

t细胞沿着连续的状态经历激活和分化程序，可以通过流式细胞术使用表面和细胞内标记的组合来跟踪。这种动态行为是转录和转录后事件的结果，由特定转录因子的激活和表观遗传重塑启动和维持。这些信号通路以双向方式与代谢途径紧密整合:一方面，T细胞受体和共刺激分子激活代谢重编程；另一方面，代谢产物修饰T细胞的转录程序和功能。流式细胞术代表了一种宝贵的工具，可在单细胞水平上分析异质性T细胞群和复杂微环境中表型、功能、代谢和转录特征的整合，在监测癌症免疫治疗的疗效方面具有潜在的临床应用。在这里，我们回顾了基于流式细胞术的基因表达分析的最新进展，结合线粒体活性的指标，旨在揭示和表征T细胞中的主要代谢途径。以下图1、图2为T细胞的流式细胞仪检测结果。

图1 用流式细胞术检测脾细胞(SPL)和肿瘤组织(TUM)的Tregs和Tconvs中β-肌动蛋白mRNA与表面和核蛋白以及线粒体质量的结合。将MC38细胞(5 × 105)皮下注射入C57BL/6小鼠，并在肿瘤移植后17天对从脾细胞和肿瘤组织中提取的淋巴细胞进行原代流式细胞术和流式细胞术分析。根据图2中的工作流程进行染色。(一)等高线图，显示了根据Foxp3核内表达识别SPL和TUM中Tregs和Tconvs的策略。(二)直方图重叠，显示每个标记在指定细胞亚群和组织中的表达。图例中的数字表示几何平均荧光强度(gMFI)。灰色直方图表示作为对照的荧光负一(FMO)阴性对照或CD4阴性细胞。

图2 从脾脏(SPL)或肿瘤(TUM)的Tregs和Tconvs获得的流式细胞术数据的无监督聚类分析。门控CD4 T细胞被下采样并连接在一起，根据Foxp3表达手动鉴定两个样品中的Tregs和Tconvs。(一)显示SPL和TUM的连接CD4 T细胞中门控Tregs和Tconvs重叠的图。(二)根据图3所示标记的表达，来自SPL和TUM的Treg和Tconv群体在串联样本中的分布的tSNE(左)和UMAP(右)可视化。在Flowjo 10.5.3中，两个多维度缩减分析都是使用默认设置运行的。(三)在SPL上皮性肿瘤患者的串联CD4 T细胞中，重叠的Treg和Tconv亚群中Ki67与其他标记物共表达的表现

 

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