【摘要】 深度解析高效液相色谱荧光检测技术在类固醇定量分析中的实践方案，涵盖临床诊断/药品质检/环境监测领域，揭秘样品前处理、荧光衍生化与色谱条件优化核心要点

类固醇作为天然活性物质，在医疗与环境监测中需求日益增长。面对复杂样品基质和痕量检测挑战，​高效液相色谱荧光检测法（HPLC-FLD）​​ 凭借其高灵敏度与成本效益，成为类固醇定量分析的首选方案。本文将系统解析该技术在临床诊断、药品质检及环境监测中的实践要点。

 

一、类固醇检测技术对比

主流分析方法包括：

  • ​免疫测定法​：操作简便但特异性不足
  • ​气相色谱-质谱（GC-MS）​​：需复杂前处理
  • ​LC-MS/MS​：设备成本高昂
  • ​HPLC-FLD​：兼具灵敏度高​（LOD达pg级）与设备普及率优势

​技术亮点​：FLD通过荧光标记实现选择性检测，尤其适合低浓度类固醇分析​

 

二、HPLC分离体系优化关键

反相色谱为类固醇分离核心方案：

参数

优化方案

作用效果

固定相

C18色谱柱（主流）

提升保留能力

流动相

甲醇/乙腈-水体系

调节分离选择性

柱温

30-45℃

改善峰形

色谱柱规格

窄径短柱（如2.1×50mm）

节省60%溶剂与时间

 

三、样品前处理技术演进

针对不同基质需定制预处理方案：

 

四、荧光检测核心策略

1. 直接检测法

适用于内源荧光类固醇​（如雌二醇、群勃龙）

2. 衍生化检测法

通过荧光标记试剂解决非荧光类固醇检测瓶颈：

​衍生化选择原则​：

  • 羧基类固醇 → 选用DAN-Cl标记
  • 酮基类固醇 → 选用DMEQ-TAD试剂

 

参考文献：[1] Hameedat, F.; Hawamdeh, S.; Alnabulsi, S.; Zayed, A. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with Fluorescence Detection for Quantification of Steroids in Clinical, Pharmaceutical, and Environmental Samples: A Review. Molecules 2022

 

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