一文读懂圆二色光谱仪（CD）

圆二色光谱Circular Dichroism(简称CD)是应用最为广泛的测定蛋白质二级结构的方法，是研究稀溶液中蛋白质构象的一种快速、简单、较准确的方法。它可以在溶液状态下测定，较接近其生理状态。而且测定方法快速简便，对构象变化灵敏，

根据CD谱法的原理和测试要求设计制成的仪器称为圆二色光谱仪。它是目前研究蛋白质二级结构的主要手段之一，并已广泛应用于蛋白质的构象研究中。

【概念解析】

圆二色性:

光学活性分子对左、右圆偏振光的吸收不同，使左、右圆偏振光透过后变成椭圆偏振光，这种现象称为圆二色性。

圆二色性常用椭圆θ度表示，是平面偏振光离开样品池的角度。

圆二色光谱仪(CD)样品要求：

1. 测试时需要空白溶剂做对照扣背景，麻烦样品及溶剂至少各备5ml;

2. 样品及溶剂的浓度对测试影响较大，不宜过高或过低(浓度过高，会超电压，数据不准;浓度过低，没有信号)：不同物质，最佳浓度不同，测试时不对浓度进行摸索

a. 如之前测过CD或有相关文献，建议按对应浓度准备;

b. 如没测过CD或无文献，但扫过紫外全谱，建议优选紫外浓度的一半配制样品，如不合适再调整(直接用紫外对应浓度，测CD的话浓度偏高);

c. 如以上均无，建议按0.5mg/ml来配(蛋白质样品，浓度一般0.1-0.5mg/ml)，但无法保证该浓度合适

【固体CD制样要求】

1. 固体CD需要10-20mg，最好是粉末样品，特殊样品可以具体沟通。

2. 如果样品透过率不好，建议采用积分球模式。

另外送样之前，注意下样品保存温度，是否需要冰袋或者干冰，防止样品寄样时发生变质，影响测试结果.

常见问题

① 圆二色谱测试，样品是溶在PBS中测吗?

是在PBS里面测试，来样时最好溶解好，或者提供溶剂，要测试背景用的;

② 圆二色谱测试波长范围是紫外吸收的吗?浓度要求是多少?

紫外的波长;

紫外吸收测试的吸收值为1-2时的浓度是最佳的;

③ CD光谱是什么意思?

用于推断非对称分子的构型和构象的一种旋光光谱。

④ CD谱是干什么的?

旋光测定是检测一个定波长条件下的比旋光度值，仅此一个波长的比旋光度值为零，不能确认它为消旋体。CD图谱是在一定波长范围内测定的一系列数据，如果有Cotton效应，应当认为它是一个光活异构体，CD谱是用来测分子的绝对构型的。

⑤ 如何解析CD谱，做天然药物化学的课题，分离到一个新的化合物，可看不懂CD谱，确定不了绝对构型。

查找与你的新化合物结构相近已知化合物的CD文献，尽量多找几个，确定该类化合物CD谱与其构型的关系，一般cotton效应正负相反表示某个手性碳的构型相反，已知与未知对照，就基本可以确定了。还可以用核磁氢谱的耦合常数来判断相对构型，一般顺式耦合常数大于反式耦合常数。

如果你分的化合物只是原来已知化合物取代基的不同，就找已知化合物的CD图对比确定;再有一种情况，如果分的化合物是结构的新颖，就找懂量子计算化学的人帮你用相关的软件模拟进行CD模拟，会把所有不同的构型的CD图模拟出来，你就把你现在的CD图比较，哪种构型的模拟图谱相似，你的绝对构型就是哪种。

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