激光扫描共聚焦显微镜

随着生命科学研究的不断深入和荧光探针技术的迅猛发展，激光扫描共聚焦显微技术（laser scanning confocal microscope，LSCM）在生物及医学等研究领域的应用受到越来越多的关注。激光扫描共聚焦显微镜能通过一种或多种荧光探针标记研究对象，在荧光显微镜基础上配置激光扫描装置，采用共轭聚焦方式，对观察样品进行逐点扫描，实现高分辨的共聚焦图像，同时能够通过控制 Z 轴焦平面，实现三维成像，是目前最先进的分子细胞生物学的分析仪器。

激光扫描共聚焦显微技术能够用荧光标记活细胞、生物组织切片、活体等，观察它们的结构及特定分子、离子的生物学变化。它通过三维图像重建分析手段对细胞生物的物质、离子进行定性、定量、定时和定位检测。这项技术的出现革新了分子及细胞水平的研究方式，为监测药物、材料靶向分布以及监控疾病的整体发展过程等相关研究提供了更有效的测量方式。

激光共聚焦显微镜脱离了传统光学显微镜的场光源和局部平面成像模式，它的成像原理是采用激光束作光源，激光束经照明针孔形成点光源被二向色镜反射，再通过物镜聚焦于样品，对样品焦平面上的点进行逐点扫描。由于样品发射的荧光波长比入射光长，可直接通过二向色镜并到达探测针孔处，经光电倍增管采集，输入计算机得到荧光图像。而非焦平面的光线则被探测针孔阻挡，不能到达检测器。LSCM 高分辨的荧光成像能力也正是来源于这种双共轭的成像方式，即照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和探测针孔，以此屏蔽焦平面外点的荧光信号。

参考文献：

[1]李成辉, 田云飞, 闫曙光. 激光扫描共聚焦显微成像技术与应用[J]. 实验科学与技术, 2020, 18(4):6.

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