药物的多重定量分析

使用免疫亲和性LC-MS/MS对抗体-药物偶联物与实验室CBI二聚体的体内有效载荷进行多重定量分析

抗体-药物偶联物（ADC）的定量分析包括将ADC切割成代表不同成分的较小分析物，并随后从多个分析中进行测量，以进行更全面的药代动力学（PK）评估。如果ADC的缀合位点是均匀的，并且接头药物对蛋白酶是稳定的，则可以通过ADC的蛋白水解消化使用多重分析同时获得包括与抗体（或抗体缀合药物，acDrug）保持缀合的药物和总抗体的多个PK分析物。多重免疫亲和液相色谱-质谱法（LC-MS）/MS PK分析，涉及免疫亲和富集、前药的酶促转化、胰蛋白酶消化和LC-MS/MS，用于由携带二聚环丙苄吲哚（CBI）有效载荷的连接药物（双卡霉素类似物）构建下一代ADC。抗体-药物偶联物（ADC）作为一种平台，有可能将细胞毒性药物直接输送到靶细胞，从而降低脱靶毒性^[1]。因此，与单独全身给药传统的小分子药物相比，ADC可以获得更宽的治疗窗口。多重免疫亲和性LC-MS/MS测定法，用于量化具有不稳定CBI有效载荷的ADC的细胞毒性(acDrug)和总抗体^[2]。该测定需要前药的酶促转化，以准确定量所有完整形式的CBI二聚体的总和。由于药物在通常用于丝氨酸蛋白酶的还原环境下的反应性而导致的额外复杂性被减弱，同时在变性有机溶剂和热应力下保持胰蛋白酶的活性。虽然这种方法最适用于分析具有特定位点突变的ADC，该位点突变被设计为用作药物附着点，但这种测定允许将该方法扩展到具有不同接头化学性质的ADC。随着越来越多的下一代ADC使用位点特异性突变来控制结合位点，我们预计这种方法可以很容易地从这种构建体中生成分析方法。最后，新的多重分析提供了从acDrug和总抗体的比率得出的平均DAR的途径。在由于生物转化而无法进行完整蛋白质水平的分析的情况下，测定格式可以是破译DAR的有价值的工具。

(1) Lambert, J. M.; Berkenblit, A. Annu. Rev. Med. 2018, 69, 191−207.

(2) Chau, C. H.; Steeg, P. S.; Figg, W. D. Lancet 2019, 394, 793−804.