【摘要】 苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，Bt）是一种世界上应用广泛的生防微生物，它具有高度的杀虫特异性和对人畜无害的优点。

苏云金芽胞杆菌（Bacillusthuringiensis，Bt）是一种世界上应用广泛的生防微生物，它具有高度的杀虫特异性和对人畜无害的优点。主要的杀虫成分是杀虫晶体蛋白，其由cry和cyr基因编码。其中cry9类基因的表达产物对鳞翅目多种害虫具有较高的杀虫活性，由于检测方法的局限性，发现的基因种类不多，活性高的基因更少。为了充分发掘Bt菌株中cry9类基因资源，研究人员开发了一种基于PCR产物，利用高分辨熔解曲线(highresolutionmeltingHRM)对cry9类基因进行分型的方法。根据所有己报道的cry9类基因的保守区设计一对扩增片段为100bp的通用鉴定引物，利用高分辨熔点仪对产物的熔解曲线进行分析，由于扩增产物的碱基组成不同，不同类型的基因产生不同的熔解曲线，从而将样品进行基因分类。该方法可以高通量地进行基因分型，特别是可以检测出已知及新型的cry9类基因。本研究对72株苏云金芽胞杆菌标准菌株进行cry9类基因型的鉴定，PCR鉴定呈阳性的菌株有3株。根据熔解曲线发现B.thuringiensis subsp. fukuokoensis(TO3CO01）含有cry9Aa基因片段，B.thuringiensis subsp. sumiyoshiensis (TO3BO01）含有cry9Da和两个新型cry9类基因片段，B.thuringiensis subsp. Japonensis (1230I)含有cry9Da基因片段。根据这些基因的全长序列设计了扩增cry9类基因的全长引物，成功克隆上述基因，并被国际Bt命名委员会分别正式命名为Cry9Aa3、Cry9Da3、Cry9Da4、Cry9Eb2、Cry9Ee1。利用表达载体pEB在大肠杆菌Rosetta(DE3）中对这些基因进仃表达，表达产物均为130kDa左右的蛋白。其中Cry9Aa3、Cry9Eb2、Cry9Eel对鳞翅目害虫小菜蛾杀虫活性较好，在100mg/kg浓度时的校正死亡率分别为98%、92% 和96% ，而Cry9Da3和Cry9Da4对小菜蛾无杀虫活性。

 

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