【摘要】 使用冷冻TEM 可以避免 TEM 的显着缺点，例如生物样本的脱水、化学固定和/或染色。

胞外囊泡”包括原核和真核细胞释放或分泌的所有类型的囊泡[1]。细胞分泌EV是为了维持其生理平衡，或作为对细胞外/环境刺激的反应[2]。在人体体液中，EV可以从血液、尿液、唾液、滑液和精液中分离出来[3]。研究表明，EV从它们的亲代细胞中继承蛋白质、脂类和遗传物质，还含有某些由刺激产生的独特蛋白质或遗传物质[4]。最近的临床应用是作为替代标记物、共刺激和药物载体。

 

透射电子显微镜 (TEM) 和透射扫描电子显微镜 (TSEM) 表示扫描电子显微镜 (SEM) 在透射模式下的应用，已用于检测和表征颗粒，成像分辨率低至约 1 nm。在细胞外囊泡，TEM 还因其检测和表征单个细胞外囊泡的能力而受到重视。此外，在 TEM 中采用免疫金标记可以提供有关 EV 表面蛋白的生化特性的信息。

 

使用冷冻TEM 可以避免 TEM 的显着缺点，例如生物样本的脱水、化学固定和/或染色。在冷冻 TEM 成像中，样品直接应用到 EM 网格上，进行玻璃化和可视化，从而可以对接近其自然状态的 EV 进行表征。

 

在本章中，我们将介绍在 TEM 和冷冻 TEM 成像之前在网格上准备 EV 的分步指南。最后，我们提供了自动图像处理分析指南，以提供细胞外囊泡的尺寸分布。

 

描述了在电子显微镜和低温电子显微镜成像之前，如何在网格上制备细胞外囊泡的逐步指南。此外，我们还提供了自动图像处理分析的指南，以处理大量图像以获得良好的统计分析。这种自动处理被实现为计算机程序，并用于检测颗粒(囊泡)并确定其直径大小。

 

[1]. van der Pol E, Boing AN, Gool EL, Nieuwland R (2016) Recent developments in the nomenclature, presence, isolation, detection and clinical impact of extracellular vesicles. J Thromb Haemost 14(1):48–56

[2]. Yuana Y, Sturk A, Nieuwland R (2013) Extracellular vesicles in physiological and pathological conditions. Blood Rev 27(1):31–39

[3]. van Der Pol E, Boing AN, Harrison P, Sturk A, Nieuwland R (2012) Classification, functions, and clinical relevance of extracellular vesicles. Pharmacol Rev 64(3):676–705

[4]. Yanez-Mo M, Siljander PR, Andreu Z et al (2015) Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles 4:27066

 

科学指南针是杭州研趣信息技术有限公司推出的主品牌，专注科研服务，以分析测试为核心。团队核心成员全部来自美国密歇根大学，卡耐基梅隆大学，瑞典皇家工学院，浙江大学，上海交通大学，同济大学等海内外名校，为您对接测试的项目经理100%具有硕士以上学历。我们整合高校/社会闲置仪器设备资源，甄选优质仪器，为广大科研工作者提供方便、快速、更具性价比的分析测试服务。

 

免责声明：部分文章整合自网络，因内容庞杂无法联系到全部作者，如有侵权，请联系删除，我们会在第一时间予以答复，万分感谢。