【摘要】 CLSM 由光学成像系统、扫描系统、计算机系统三部分组成。

四、仪器原理

CLSM 由光学成像系统、扫描系统、计算机系统三部分组成。

一方面，在传统的光学显微镜的基础上，CLSM 采用激光作为点光源，由于激光具有良好的汇聚性和高能量的特点，大大地缩小了扫描区域，进而减少了同一视野内相邻样品之间发射信号的干扰。

另一方面，在显微镜的检测器前，在焦平面的共轭位置加装了针孔装置（Pinhole），

从而使得只有来自焦平面的信号能够通过Pinhole，其他非焦平面的信号被 Pinhole 阻挡，

所以检测器只能接收到来自焦平面的发射光信号

实现点对点的成像，即“共轭成像”，从而得到高分辨率的图像。

 

五、主要功能

单通道及多通道荧光图像拍摄：这是 LSCM 使用最广泛和最常用的功能之一，最高成像分辨率可达到 180nm，可以清晰地呈现细胞的微细结构和细胞器，为荧光信号的定位、定性、定量提供直观的图像。此外，还可以获得荧光和明场同时叠加的图片。

多维图像拍摄：

Z 轴扫描及三维构建（Z-Stack）：LSCM 通过 Z-stack 可以对样品进行“光学切片”，用于分析样品的三维立体结构，目标分子的空间分布等。

时间序列扫描（Time Series）：时间序列扫描主要用于获取反映样品连续变化的图像信息。时间序列扫描（需配备活细胞工作站）可实现对活细胞的实时动态观测，记录细胞内特定成分的变化并获得动力学曲线。

光漂白实验（Bleaching）：光漂白实验主要用于观察靶分子在细胞内或细胞间的运动或定位信息，如荧光漂白后恢复（FRAP），光控蛋白的激活，及荧光共振能量转移等。

光漂白实验（Bleaching）：光漂白实验主要用于观察靶分子在细胞内或细胞间的运动或定位信息，如荧光漂白后恢复（FRAP），光控蛋白的激活，及荧光共振能量转移等。

多视野扫描（Positions）：多视野扫描可以自动对多个指定视野进行图像拍摄，Position 定位功能主要应用于实现物镜直接切换、实现复位等方面。