【摘要】 免疫共沉淀(CO-IP)是研究蛋白质-蛋白质相互作用的一种重要的经典方法。

蛋白质通常通过与其他蛋白质的相互作用(即蛋白质-蛋白质相互作用)来执行功能。确定相互作用关系常常为蛋白质的功能和相关的分子作用机制提供重要线索。在广泛的蛋白质组学研究中，研究人员使用来自大肠杆菌菌株的亲和标签纯化方法鉴定了5993种蛋白质相互作用，并将功能分配给蛋白质，如蛋白质合成，氨基酸代谢，生物膜形成和运动。蛋白质相互作用在疾病中的研究可能揭示了通路的紊乱，以了解蛋白质的调节机制和蛋白质合作伙伴在疾病中的可能作用。

 

免疫共沉淀(CO-IP)是研究蛋白质-蛋白质相互作用的一种重要的经典方法。基本原理是使用特异性抗体与靶蛋白特异性结合并形成抗原-抗体复合物，其包含与靶蛋白相互作用的抗体，靶蛋白和其他蛋白质，然后使用特定材料沉淀抗原-抗体复合物。目前，抗原-抗体复合物的收集方法主要是利用琼脂糖或磁珠与蛋白A或G结合到抗体的保守区域。蛋白质印迹或质谱法分析富集的蛋白质，然后用来鉴定相关的蛋白质。

 

CO-IP的一般步骤包括蛋白质提取物的制备，特异性抗体与珠子的偶联，蛋白质复合物的纯化和CO-IP复合物的分析。该方法还有其他步骤，如预先清除蛋白质样品，以消除背景噪声。然而，在许多研究中，这一步没有被执行。因此，我们进行了一系列的实验研究，以探讨是否需要一个预透明步骤的CO-IP测定和什么因素影响非特异性蛋白结合的珠子。本研究为CO-IP程序的标准化以减少假阳性结果提供了实验依据。

 

1.Removal of nonspecific binding proteins is required in co-immunoprecipitation with nuclear proteins, Xi Zeng, Wei-Hong Zeng, Jun Zhou, Xiao-Min Liu, Guo Huang, Hong Zhu, Shuai Xiao, Ying Zeng, and Deliang Cao, BioTechniques 2022 73:6, 289-296.

 

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