【摘要】 一般来说，包括NP-40和Triton X-100在内的非离子洗涤剂会破坏脂质-蛋白质相互作用，但不会破坏蛋白质-蛋白质复合物的形成，而离子洗涤剂如Chaps会破坏两者。

蛋白-蛋白相互作用调节多种细胞过程，包括信号转导、蛋白定位和酶激活[1]。

 

共免疫沉淀法(Co-IP)已经应用了几十年，由于其重复性高、操作简单且相对便宜，因此仍然是分析蛋白质-蛋白质相互作用最有效的方法之一。

 

为了执行co-IP，第一步是准备细胞裂解物，内源性或外源性表达感兴趣的蛋白质。

 

选择一种最佳的裂解缓冲液，它足以提取感兴趣的蛋白质，但不破坏其复杂的形成，是试验成功的关键因素之一。

 

一般来说，包括NP-40和Triton X-100在内的非离子洗涤剂会破坏脂质-蛋白质相互作用，但不会破坏蛋白质-蛋白质复合物的形成，而离子洗涤剂如Chaps会破坏两者。

 

通过将裂解液与特异性靶向感兴趣蛋白质的抗体孵育，捕获感兴趣的蛋白质及其物理相互作用。

 

选择特定抗体是IP/co-IP的另一个关键因素。

 

igg结合蛋白A/G共轭树脂(如琼脂糖、蔗糖或磁珠)，然后与裂解物-抗体混合物孵育，抗体-蛋白质复合物通过离心、柱或磁架/支架沉淀。

 

为了消除非结合蛋白，树脂-抗体-蛋白复合物被多次清洗。

 

最后，通过在变性缓冲液中煮沸，抗体-蛋白复合物从树脂中释放出来，并准备进行分析。

 

通过co-IP检测弱和/或瞬时蛋白质相互作用可能具有挑战性；然而，如果结合交联或其他蛋白质-蛋白质相互作用方法，则可以克服这一问题。

 

[1] Tang Z , Takahashi Y .Analysis of Protein–Protein Interaction by Co-IP in Human Cells[J].methods in molecular biology, 2018.DOI:10.1007/978-1-4939-7871-7_20.

 

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