【摘要】 通常用于处理数量有限的生物样品的方案，用于LM和TEM，涉及琼脂糖或明胶预包埋。

光学显微镜和透射电子显微镜是研究生物体、组织和细胞的结构-功能关系的有力技术。它们为研究生物样品提供了无与伦比的分辨率和灵敏度。但是，它们适用于通过分离和纯化或扩增可以获得临界量物质的样品。随着生物学的进步，分离和纯化稀缺的生物样品成为可能;有机体、细胞或亚细胞结构。当这些样品的制备不能按比例放大或放大时，有限的可用材料可能会阻碍其处理，用于LM和TEM。

 

通常用于处理数量有限的生物样品的方案，用于LM和TEM，涉及琼脂糖或明胶预包埋。然而，这些程序有其固有的局限性;其中，鉴定凝固凝胶中样品的困难和凝胶的易碎性。为了克服这些限制，Taupin等人[1]报告了一种简单有效的制备方法，用于LM和TEM预嵌入稀缺的生物样品。对于显微镜技术而言，有效和可重复处理有限数量的生物样品的能力将有助于细胞生物学的进步。

 

图1. 含有成纤维细胞的低温恒温切片[1]

 

一种制备技术可以处理稀缺的生物样品，即不能扩增的有限数量的样品，用于LM和TEM。该方案是基于预嵌入生物材料的BSA和BA的基质，交联和聚合。该矩阵与大多数LM和TEM协议和程序兼容。光镜下，在成纤维细胞的低温切片上观察到稀疏的细胞密度，预包埋作为悬浮液，并用甲蓝紫染色(图1)。高倍照片显示细胞形态保存完好(图2)。同样，在预包埋成纤维细胞的低温切片上观察到细胞聚集(数据未显示)。电镜下，在低倍率下，在LR White中预先包埋的成纤维细胞薄片上观察到细胞聚集。这些切片的高倍照片显示，细胞和细胞器的形态，如线粒体和光滑的内质网，保存得很好。

 

同样地，在预先包埋成纤维细胞的薄片上也观察到细胞的聚集，并且它们的形态也被很好地保存了下来。当分析在LR White或araldite中作为悬浮液预包埋的成纤维细胞样本时，偶尔会观察到单细胞(数据未显示)。然而，电镜数据的质量受到这样一个事实的影响，即样品在固定后没有用锇染色，在PF和GA中。锇后固定是常规超微结构形态学的常用程序。由于两个主要原因，该步骤不能用于预包埋在BSA和BA中的稀缺生物样品。首先，所研究样品的稀缺性阻碍了锇在预嵌入BSA和BA之前的后固定。这将导致样品被锇污染或样品丢失，随后需要洗涤以洗去锇。其次，一旦预先嵌入BSA和BA，基质就会因锇染色而变暗(未发表的数据)。这干扰了样本(未发表的数据)的检测和观察。尽管如此，这些结果表明，样品的制备，预包埋在BSA和BA，是兼容的标准LM和TEM程序。

 

图2. 高倍镜下含有成纤维细胞的低温恒温切片[1]

 

[1] Taupin P .Processing scarce biological samples for light and transmission electron microscopy[J].European journal of histochemistry: EJH, 2009, 52(2):135-139.

 

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