【摘要】 透射电子显微镜 (TEM) 技术可以实现细胞内部结构细节的可视化。

透射电子显微镜 (TEM) 是一种强大的技术，可用于以非常高的分辨率可视化样本的超微结构细节。生物样本在传统 TEM 成像之前需要几个准备步骤。一般来说，样品制备包括固定、后固定、脱水、包埋和超薄切片等基本步骤。然而，这些步骤的技术细节因方案而异，包括样品固定剂、脱水溶液和包埋介质的类型和浓度的变化。因此，必须根据样品类型优化样品制备步骤，这对于获得 TEM 成像的最佳结果至关重要。

 

透射电子显微镜 (TEM) 技术可以实现细胞内部结构细节的可视化。在 TEM 成像之前，生物样品必须经过几个根据样品类型进行优化的制备步骤。目前，用于 TEM 成像的血液样本制备方案有限。在这里，我们提供了准备用于 TEM 成像的血液样本的详细分步方法。该协议可以实现血液免疫细胞超微结构的稳健可视化。

 

此外，我们还描述了可用于区分血液中不同免疫细胞的典型细胞特征，例如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。该协议可用于研究血液免疫细胞在各种生理和疾病条件下的超微结构变化。

 

图 1. 代表性 TEM 图像揭示了使用该方案制备的血液免疫细胞的超微结构细节。 (a) 中性粒细胞显示四个细胞核 (N)、特异性颗粒 (SG)、非特异性颗粒 (NSG) 和空囊泡 (EV)。 (b) 嗜酸性粒细胞显示两个细胞核 (N)、颗粒中心具有典型晶体的特定颗粒 (SG) 和一个空颗粒 (EG)。(c) 淋巴细胞具有一个大的圆形细胞核 (N) 和线粒体 (Mt)。 (d) 单核细胞有一个大的肾形核 (N)、线粒体 (Mt) 和溶酶体 (Ly)。 (a、b、d) 的比例尺为 2 µm，(c) 的比例尺为 1 µm。【1】

 

人类血液样本含有主要的免疫细胞类型，包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。图 1 显示了使用该方案获得的四种免疫细胞类型的代表性图像。这些主要免疫细胞可以根据其独特的形态在 TEM 图像中进行识别。中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的核分别至少有 3-5 个或 2-3 个叶，可以与其他细胞类型清楚地区分开来（图 1a-b）。

 

同时，单核细胞有一个大的肾形核，而淋巴细胞有一个大的圆形核，可以占据细胞大小的 90%（图 1c-d）。相反，中性粒细胞和嗜酸性粒细胞含有大量细胞质颗粒和有限数量的线粒体，而单核细胞和淋巴细胞含有大量线粒体和溶酶体（图1）。最后，这些细胞的大小可用于识别 TEM 图像中的免疫细胞类型。中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的直径约为 12-15 µm，而淋巴细胞的直径约为 7-12 µm。单核细胞是最大的循环免疫细胞，直径约为 15-18 µm。

 

【1】Nimshitha Pavathuparambil Abdul Manaph, Samia M. Ltaief, Wared Nour-Eldine, Janarthanan Ponraj, John Agcaoili, Said Mansour, Abeer R. Al-Shammari, An optimized protocol for the preparation of blood immune cells for transmission electron microscopy,Micron, Volume 173,2023, 103517,

 

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